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人缺血修饰白蛋白IMAELISA新葡萄京娱乐场

更新时间:2021-11-17

简要描述:

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ELISA新葡萄京娱乐场的操作详情:

1. 使用前,将所有试剂充分混匀,不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差。

2. 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数,每个标准品和空白孔建议做复孔,每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。

3. 加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内,马上加入50ul的生物素标记的抗体,盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育45分钟。

4. 甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干,重复此操作4次,如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。

5. 每孔加入100ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。

6. 甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干,重复此操作4次,如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。

7. 每孔加入底物A、B各50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育5分钟,避免光照。

8. 取出酶标板,迅速加入50ul终止液,加入终止液后应马上测定结果。

9. 在933nm波长处测定各孔的OD值。


该新葡萄京娱乐场组成包括:96孔酶标板、酶标二抗、四环素抗体工作液、四环素6个浓度标准品溶液,底物显色液、终止液、浓缩洗涤液、浓缩复溶液、高浓度标准品溶液、盖板膜、自封袋、说明书和质检报告,上海晶抗生物科技有限企业欢迎新老客户前来订购。


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双抗体夹心法:

1. 包被:用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1~10μg/ml,在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml,4℃ 过液,次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次,每次3分钟,(简称洗涤,下同)。

2. 加样:加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃ 孵育1小时,然后洗涤,(同时做空白孔,阴性对照孔及阳性对照孔)。

3. 加酶标抗体:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml,37℃ 孵育0.5~1小时,洗涤。

4. 加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分钟。

5. 终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。

6. 结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+"、“-"号表示;也可测OD值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔OD值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。


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◇ 洗涤方法:

1. 自动洗板机:每孔加入洗涤液350μl,注入与吸出间隔60秒,洗板5次。

2. 手工洗板:甩尽孔内液体,在洁净的吸水纸上拍干,每孔加洗涤液350μl,浸泡1-2分钟,吸去(不可触及板壁)或甩掉酶标板内的液体,在厚的吸水纸上拍干,洗板5次。


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