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教你正确操作新葡萄京娱乐场免疫球蛋白A(IgA)ELISA新葡萄京娱乐场
发布时间:2021-05-18   点击次数:321次

新葡萄京娱乐场免疫球蛋白新葡萄京娱乐场检测原理:
新葡萄京娱乐场免疫球蛋白新葡萄京娱乐场采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被对称性免疫球蛋白A(IgA)抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的对称性免疫球蛋白A(IgA)新葡萄京娱乐场呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。

新葡萄京娱乐场免疫球蛋白新葡萄京娱乐场样品收集、处理及保存方法:
1、血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2、血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
3、组织匀浆-----将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟。
4、取上清液保存------如果样品不马上使用,应将其分成小部分-70 ℃保存,避免反复冷冻。
注:标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。

新葡萄京娱乐场免疫球蛋白新葡萄京娱乐场操作:
新葡萄京娱乐场免疫球蛋白新葡萄京娱乐场使用前,将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差。根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。
标本用标本稀释液1:1稀释后加入50ul于反应孔内。加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。马上加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育1小时。甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。每孔加入底物A、B各50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育10分钟。避免光照。取出酶标板,迅速加入50ul终止液,加入终止液后应马上测定结果。在450nm波长处测定各孔的OD值。局限6号标准品以上的结果为非线性的,根据此标准曲线无法得到精确的结果。

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1、灵敏度:最小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为1.0 nmol/L。
2、特异性:不与其它细胞因子反应。
3、重复性:板内、板间变异系数均小于10%。

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