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课堂点拨: ELISA试验操作失利的主要原因
发布时间:2021-04-07   点击次数:293次
大家知道,ELISA 测定中影响要素较多,而且其操作中有一定的技术要求,在检验中除正常反响外,有时常可见到一些错误结果(即假阳性或假阴性),那么致使试验不成功的主要原因有哪些咧?
 
标本的影响:溶血标本及混有红细胞的血清选用ELISA法检测易发生假阳性。或许是溶血血清中含有过氧化酶物质(红细胞或血红蛋白中的亚铁血红素),在洗刷过程中往往难以彻底洗脱,它可使H2O2释放出原生态氧(O),从而催化底物四甲基联苯胺生成可溶性的有色物质,即显蓝色,发生假阳性。所以严重溶血标本禁用。
   
第二,标本受细菌污染:因菌体中或许含有内源性辣根过氧化物酶,因而,被细菌污染的标本同溶血标本一样,亦可发生非特异性显色而搅扰测定结果。
   
第三,标本保存不妥:在冰箱中保存过久的标本,在间接法ELISA测定中会导致本底过深、构成假阳性;为克服上述搅扰,ELISA新葡萄京娱乐场测定的血清标本宜为新鲜收集;如不能当即测定,5d内测定的血清标本可存放于4℃,1周后测定的血清标本应低温冻存;冻存后融解的标本,蛋白质局部浓缩,分布不均,应充分混合后再测定,但混匀时应轻柔,不行激烈振动。
   
第四,标本凝结不全:在工作中,有时为了争取时间快速检测,常在血液还未开始凝结时即强行离心别离血清,使血清中仍残留部分纤维蛋白原,在 ELISA 测定过程中能够构成肉眼可见的纤维蛋白块,易构成假阳性结果;因而血液标本收集后有必要使其充分凝结后再别离血清。
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