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绵羊γ干扰素(IFN-γ)酶联免疫分析新葡萄京娱乐场
发布时间:2015-12-01   点击次数:470次

绵羊γ干扰素(IFN-γ)酶联免疫分析新葡萄京娱乐场
本新葡萄京娱乐场仅供研究使用。
检测范围:
96T
2.0ng/L -50 ng/L
使用目的:
本新葡萄京娱乐场用于测定绵羊血清、血浆及相关液体样本中巨噬细胞中γ干扰素   (IFN-γ)含量。
实验原理
本新葡萄京娱乐场应用双抗体夹心法测定标本中绵羊γ干扰素(IFN-γ)水平。用纯化的绵羊γ干扰素(IFN-γ)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入γ干扰素(IFN-γ),再与  HRP 标记的γ干扰素(IFN-γ)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物 TMB显色。TMB在   HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的γ干扰素(IFN-γ)呈正相关。用酶标仪在 450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中绵羊γ干扰素(IFN-γ)浓度。
新葡萄京娱乐场组成
30倍浓缩洗涤液
20ml×1瓶
6ml×1瓶
12孔×8条
6ml×1瓶
6ml×1瓶
6ml×1/瓶
终止液
6ml×1瓶
0.5ml×1瓶
1.5ml×1瓶
1份
2   酶标试剂
标准品(96ng/L)
标准品稀释液
3   酶标包被板
4   样品稀释液
5   显色剂 A液
6   显色剂 B液
10   说明书
11   封板膜
12   密封袋
2张
1个
标本要求绵羊γ干扰素(IFN-γ)酶联免疫分析新葡萄京娱乐场
1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
2.不能检测含NaN3的样品,因   NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤
1.  标准品的稀释:本新葡萄京娱乐场提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
48 ng/L
24 ng/L
12 ng/L
6.0 ng/L
3.0 ng/L
5号标准品
4号标准品
3号标准品
2号标准品
1号标准品
150µl的原倍标准品加入  150µl标准品稀释液
150µl的  5号标准品加入  150µl标准品稀释液
150µl的  4号标准品加入  150µl标准品稀释液
150µl的  3号标准品加入  150µl标准品稀释液
150µl的  2号标准品加入  150µl标准品稀释液
2.  加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50µl,待测样品孔中先加样品稀释液 40µl,然后再加待测样品 10µl(样品zui终稀释度为 5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

温育:用封板膜封板后置 37℃温育30分钟。
配液:将 30倍浓缩洗涤液用蒸馏水  30倍稀释后备用
洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30秒后弃去,如此重复 5次,拍干。
加酶:每孔加入酶标试剂 50µl,空白孔除外。
温育:操作同 3。
洗涤:操作同 5。
显色:每孔先加入显色剂 A50µl,再加入显色剂 B50µl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
10.终止:每孔加终止液    50µl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。测定应在加终止液后 15分钟以内进行。
操作程序总结:
计算以标准物的浓度为横坐标, OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与  OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的 OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。

注意事项绵羊γ干扰素(IFN-γ)酶联免疫分析新葡萄京娱乐场
1.新葡萄京娱乐场从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间控制在 5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4.请每次测定的同时做标准曲线,做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本  OD值大于标准品孔*孔的 OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请zui后乘以总稀释倍数(×n×5)。
5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物请避光保存。
7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9.本试剂不同批号组分不得混用。
10.如与英文说明书有异,以英文说明书为准。
保存条件及有效期
1.新葡萄京娱乐场保存:;2-8℃。
2.有效期:6个月

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地址:上海市金山工业区亭卫公路6558号9幢2441室

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